探索生命《生物學》100
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1.
基因重組技術的第二步是將這些DNA片段與載體vector結合。載體是一塊DNA片段，載體是運輸DNA的工具；載體將基因傳送到新的宿主細胞。
2.
DNA重組技術，對細菌使用的載體，最常見的有二種：質體plasmids和噬菌體bacteriophages。
3.
質體是小型、環狀的DNA分子，出現於細菌的細胞質。質體是獨立的，它與細菌細胞的主要染色體不同；有些質體只有1、2個基因，另外一些質體可能有主要染色體的1/5大小，這種質體帶有許多基因。
4.
細菌的質體有許多對抗多種抗生素的基因，質體基因對抗的對象包括，鏈黴素streptomycin、四環素tetracycline、安比西林ampicillin，這些質體是基因重組技術的重要工具。
5.
並非隨便一塊DNA片段都可以拿來當成載體使用，載體的DNA必須有複製的起始點replication
origin（ori）區域，讓提供的基因進入宿主後可以進行複製；
6.
缺少ori區域，不論是載體的DNA或是提供基因的DNA皆無法複製；必須要有夠多嵌入外來基因的載體，才能夠產生足夠的基因改變宿主。
7.
質體的複製是獨立進行的，它與染色體的複製無關，一個本來只有2、3質體的細胞，進行質體複製之後，會快地就有1千個或超過這個數字的質體。
8.
從細菌細胞分離出來的質體，放到限制酶中，限制酶將環狀的DNA分子切個成尾端帶有黏性的線性分子；另一個有機體提供的DNA，也用相同的限制酶處理，產生各種DNA片段。
9.
每一個「提供基因的DNA片段」的黏性末端的鹼基，與「質體的DNA片段」的黏性末端的鹼基，彼此是成對的、互補的，然後，將這二種DNA片段混合。
10.
「提供基因的DNA片段」的黏性末端的鹼基，與「質體的DNA片段」的黏性末端的鹼基，會配對、黏接起來，產生各種不同的組合；有些組合重新還原了質體，有些是提供基因的DNA片段彼此結合等等。
11.
這些組合裡面有基因工程人員想要的，那就是「提供基因的DNA片段」與「質體的DNA片段」鹼基互補結合，形成含有提供基因的DNA的新質體；
12.
然而，到了這一個步驟，這二種DNA片段（質體的基因與細胞提供的基因）成對的鹼基，只是以微弱的氫鍵連接，必須再用連接酶ligase黏緊DNA骨架之間的縫隙。
13.
下一步，將修飾過的質體送進細菌細胞，質體有能力使細菌細胞「轉形transform」。換句話說，當細菌細胞放進含有修飾過的質體的媒介環境中，在特殊處理下，會有少數細胞吸收質體，吸收質體的細胞比例大約是1/1000；
14.
這個道理就像Griffith將無害的肺炎雙球菌，放進含有會致病的肺炎雙球菌的死細胞中，結果無害的肺炎雙球菌變成會致病的肺炎雙球菌。
15.
DNA重組技術應用的是，質體使細胞轉形的能力。DNA重組技術，從其他有機體身上取得提供基因的DNA，將提供基因的DNA加入質體，質體被修飾成含有外來基因的新品種，細胞吸收新品種的質體，也得到外來基因。
16.
噬菌體bacteriophage是會感染細菌的病毒。噬菌體可作為載運「提供基因的DNA」到細菌細胞的載體vectors。
17.
用噬菌體殖入外來基因的程序，一開始與質體一樣：「提供基因的DNA」與「噬菌體的DNA」用同樣的限制酶切割，產生同樣的黏狀末端；
18.
將這二種DNA片段混合後，二種DNA的黏狀末端的鹼基配對結合，再以接合酶補強接合點，下一步，加入噬菌體蛋白質，噬菌體蛋白質與DNA結合形成噬菌體。
19.
接著，噬菌體接觸到細菌細胞時，會將自己的DNA注射到細菌體內，感染細菌細胞。用病毒（噬菌體）將基因輸入新宿主的程序，稱為性狀導入/轉導作用transduction。
20.
噬菌體的轉導作用，比質體的轉形作用更有效率，能得到更高比例的轉殖DNA細胞。
21.
不過，噬菌體的轉導作用也有缺點，能夠放進噬菌體的DNA片段體積是有限制的，不能太大，此外，更大的問題是，只有1種或少數幾種細菌可用噬菌體的轉導作用進行基因轉殖。
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翻譯編寫 Carol H. McFadden and William T. Keeton 《Biology》；圖片來源／bio.utexas.edu、ocw.mit.edu、Biology-pictures.blogspot
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