2013年8月20日 星期二

限制酶將DNA切割成尾端有黏性的DNA碎片 Restriction Enzymes Cut DNA Into Pieces That Have Sticky Ends

探索生命《生物學》99
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1.        每條染色體,由一條非常長的雙股螺旋DNA分子組成。現代DNA重組技術讓分子生物學家,能夠從一大堆基因中分離出他想要的基因。我們可從下面的比喻看出,切割一小段基因是多麼艱鉅的挑戰。
2.        用你的想像力,將紗線想成DNA分子,實際生活上的紗線長度大約比一段真實DNA鏈大上10萬倍。
3.        在這樣的比例下,真實DNA鍊上1個基因的平均長度,大約等於紗線的5公分;而細胞核內的DNA的總長度,大約等於100英里(160.9公里)的紗線。
4.        要如何在這個長的基因鍊上取下1個基因?第一步是,將長條的DNA分子鍊,切割成數個較小、較容易處理的片段;只要有切割的酵素,就可以辦到這一點。
5.        切個DNA的酵素稱為限制酶restriction enzymes。限制酶,這種特化的蛋白質分子大約有數百種,每一種限制酶都有其負責辨識的特定核甘酸鹼基序列,只要DNA鍊一出現限制酶負責的核甘酸鹼基序列,限制酶就動手割斷DNA鍊。
6.        舉例來說,有一種限制酶稱為EcoRI,他負責分辨DNA分子以下這種鹼基序列:
7.        只要EcoRI限制酶發現這個序列,它就會在鹼基GA之間切下,製造出二條鹼基無法成對的單股核甘酸尾巴,這單股核甘酸尾巴稱為黏狀末端sticky ends
8.        限制酶切開的單股核甘酸尾巴,被稱為黏狀末端的原因是,它們能與其他鹼基互補的單股DNA以氫鍵鍵結,或者說黏起來:
9.        限制酶能分辨出二股核甘酸序列是回文的DNA片段;回文的意思是,其中一股核甘酸由左而右的鹼基順序,剛好是另一股核甘酸由右而左的鹼基順序。
10.     因此,當限制酶沿著DNA分子移動,辨識出它要找的鹼基回文序列,限制酶就會動手割開這二股DNA分子。不論限制酶在哪裡發現它要找的鹼基回文序列,它都會動手切開這二股DNA分子。
11.     限制酶沿著DNA切割完成後,出現各種DNA片段混合物,有些DNA片段比較短,有些DNA片段比較長;混合物中的DNA片段是長是短,要看使用的是何種限制酶限制酶要切割的核甘酸序列在DNA上的出現頻率。
12.     舉例來說,如果G-A-A-T-T-C序列在DNA是偶爾才出現一次,限制酶EcoRI大約每隔4096個鹼基對,才會找到G-A-A-T-T-C序列,動手切割DNA一次。
13.     如果基因工程人員要動手切割的是人類的DNA,人類的DNA30億個鹼基對,這樣切割出來的DNA片段數量將非常地龐大。
(意思是,縱使限制酶每隔4093個鹼基對才動手切割一次,但是因為人類的DNA共有30億個鹼基對,最後切出來的DNA片段仍是多得數不清)
並且,在為數眾多的DNA片段中,只有1段是基因工程人員可能會有興趣的。
14.     事實上,限制酶可能是偵測、定位出含有它想要的基因的目標序列,就直接衝向目標基因,動手切割下這一截基因,然後就停止活動了。
(不是前一段描述的,限制酶沿著DNA鍊邊走邊找,一遇到目標序列就切割,限制酶到處切割,切出一大堆DNA片段,再從中找一塊想要的)。
15.     「限制酶定位清楚後,直接切下一截想要的DNA片段」的作法,又稱為「散彈槍法shotgun approach」。(限制酶直接射中目標序列,就像散彈槍直接射中目標一樣)

n   翻譯編寫 Carol H. McFadden and William T. Keeton Biology》;圖片來源/Studyblue.comMhhe.com

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